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原代細胞分離培養中的注意事項

發布時間: 2022-12-08  點擊次數: 191次
  原代培養的細胞,來源于胚胎、組織器官和外周血,通過特殊的分離方法制備,稱為原代細胞。初步分離得到的細胞具有與體內細胞相似的生物學特性,是研究生進行與物體相關的生命活動的理想材料。
  
  原代細胞分離培養是從體內取出人/小鼠模型動物特異性細胞,用胰蛋白酶和螯合劑(EDTA)處理,分散成單細胞,并在合適的培養基中培養,使得細胞能夠存活、生長和繁殖的過程。原代培養是指細胞、組織和器官直接從體內取出后立即進行培養。此時的細胞保持了原細胞的基本性質,如果是正常細胞,則仍保留二倍體數。但實際上,一代至第十代內培養的細胞一般稱為原代細胞培養。常用的原代培養是組織塊培養和分散細胞培養。
 
  

原代細胞分離培養

 
 

  原代細胞分離培養中的注意事項:
  
  1、原代培養材料的選擇,盡量選擇繁殖能力強的組織,如胚胎、幼體或腫瘤組織等。
  
  2、注意無菌操作。
  
  3、整個取樣操作要迅速,尤其是孕鼠要在乙醇中浸泡1min左右,時間不宜過長,以保證胚胎細胞的活性。
  
  4、采用消化法時,胰酶的溫度應低于37℃,胰酶的濃度應僅為平時消化細胞濃度的一半。因為這個過程不像細胞消化培養時的1~10min,而是至少20min,一次消化的細胞在這個胰蛋白酶消化液中繼續消化10min以上。所以胰酶不能作用太強,否則這些細胞容易受損,不容易存活。
  
  5、如果采用組織塊法,應在組織塊略干,能貼在瓶壁上時,與培養液接觸,使組織塊能浮起。如果組織塊不貼在壁上,細胞就不容易生長,即使生長也不貼在瓶壁上,生長中的細胞因為無法觀察而無法收集。
  
  6、在原代培養操作中,也可用無血清的DMEM或PBS洗滌子宮、胚胎或組織塊等。
  
  7、新生乳鼠也可作為原代細胞分離培養的培養材料。此時應將乳鼠浸泡在75%的乙醇中2~3分鐘,使皮膚充分消毒。因為乳鼠的原代培養有較高的污染概率,所以要小心處理,避免細菌污染。乳鼠原代培養細胞存活率不如胚胎細胞培養成功率高。
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